Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者成效缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现家兔自身病原体到经常出现1HG哮喘外科症状的十分困难率在儿童初期就有较好的描绘，多个家兔自身病原体阴性的儿童里面有70%在肝脏叠加后10年内身患哮喘，而随访15年的儿童这一数量缩减到84%。远比之下，占外科1HG哮喘一半以上的HG1HG哮喘的患病必要还没受益充分的研究工作。

越来越多的人开始运用于分期该系统来定义1HG哮喘的十分困难：个体在经常出现多种家兔自身病原体时转到第1先决条件，经常出现胰岛素异常时转到第2先决条件，经常出现症状时转到第3先决条件。一些多发家兔自身病原体阴性的个体，在1期和2期，十分困难较慢，并其发展为患病的1HG哮喘。我们之前描绘了一四组在首次扫描到多种家兔自身病原体抽样后有数10年无哮喘的极慢十分困难者，这四组病变人数少，但不同之处非常明确。随后，我们发现家兔自身免疫特异性CD8+T巨噬细胞底物在十分困难加速的病变里面基本不共存，但在未来会患病和长期共存的哮喘病变里面很不易扫描到。这可能表明，与十分困难病变远比，这些病变免疫性底物的通气增强。

早期研究工作表明，尽管通气性T巨噬细胞(Treg)数量正常，但哮喘病变共存一些动态缺陷，其里面包括对IL-2的底物控制能力减低。此外，哮喘病变里面的物理现象CD4+T巨噬细胞可能对通气更具抵抗性，展示出为物理现象T巨噬细胞的可抑制西移动，大自然造成的Treg和体外造成的正向Treg，以及免疫经历的CD4+T巨噬细胞里面IL-2底物西移动。本研究工作的目的是描绘了CD4+通气性T巨噬细胞(Treg)在领头极加速十分困难者里面的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以许多人为基础的纵向研究工作，在21岁以下确诊的病变亲属里面检查1HG哮喘的危险因素。我们之前描绘了长期加速十分困难者的不同之处，他们保持多重家兔自身病原体阴性多达10年，但没经常出现哮喘的外科症状，慢性或非进行时性免疫性。随后，10名继续保持无哮喘并愿意提供大量血液抽样的加速十分困难者不属于T和B巨噬细胞动态该系统性。在目前的研究工作里面，8名慢十分困难者(SP四组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁里面间的家兔自身病原体阴性。所有的参与者都处于1HG哮喘十分困难的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身病原体对某些免疫的阴性底物，然而，一名病变已经处于2期有数6年，但没经常出现外科症状，一名病变被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验者抽样时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据该系统性里面对该遗传物质进行时了单独指标。分离外周血单个核能巨噬细胞(PBMCs)，选用多参数流式巨噬细胞练成和T巨噬细胞可抑制试验指标遗传物质里面Treg的频谱、表HG和动态。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)进行时无监督聚类该系统性，指标Treg表HG。

结果：与卫生遗传物质远比，来自慢十分困难体的潜意识CD4+T巨噬细胞的监督聚类推断，激来时的潜意识CD4+ Treg频谱缩减，与糖皮质激素正向的TNFR涉及蛋白(GITR)突显缩减有关。一名HbA1c增大的病变与十分困难加速者和比如说的对照四组远比，Treg谱大同小异。动态该系统性表明，与卫生遗传物质远比，来自加速十分困难体的Treg内皮细胞的CD4+物理现象T巨噬细胞可抑制明显毁坏。展示出为对物理现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134突显的可抑制缩减。

布1 深入的表HG该系统性推断，CD4+Treg亚HG在慢十分困难数据流里面缩减。由FlowSOM转化的Treg室，汇聚在来自所有遗传物质的来时CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标示物突显解剖出10个元簇:潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)运用于9个完全相同Treg标示转化的10个元簇的MST。每个节点代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在节点四组外面剪裁。每个节点里面的饼布暗示单个标示的突显级别。(b)每个元聚类的热布，以推断整体标示突显。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)转化布，以及FlowSOM识别该系统的每个元簇的孔洞。(e-l)相比较核素为每个metacluster箱内中央线布(核素> 0.05%)已确定为HD和SP四组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T巨噬细胞(l)。浅粉红色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 运用于CITRUS的预测模HG证实，Treg频谱的缩减是十分困难加速的标志。分级门控(a - f)和柑橘该系统性(g-k)比较SP参与者和比如说的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社群的代表性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR突显进行时分离，模拟FlowSOM社群。(b) HD(小点)和SP(黑斑)四组以及遗传物质SP 606(浅粉红色)里面CD25+ cd127的频谱汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控开集的箱内中央线布;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)甜菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3突显强度着色，左下角突出的簇被识别该系统为SP和HD数据流里面间的完全相同。(j)箱内中央线布推断了在SP(黑斑)和HD(灰点)四组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相比较核素(数量)。(k)直方布推断每个簇的表HG(粉红色)和Treg标示相比较突显与着重突显(粉红色);上列，磁盘Treg_3;上头一行，磁盘Treg_4。着重与所有其他簇里面标示的突显有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对记号秩检验

布3 与卫生献血者远比，十分困难加速者潜意识treg的GITR缩减。每个潜意识CD4+T巨噬细胞元簇(潜意识T巨噬细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T巨噬细胞;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个突显标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的突显热布(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅粉红色)的FlowSOM GITR突显串联，推断直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon配对记号秩和检验，p< 0.07(浅粉红色)所有遗传物质包括，p< 0.05(粉红色)遗传物质SP 606和比如说的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR突显，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅粉红色)串联，推断直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对记号秩检验

布4 来自加速十分困难的CD4+ treg巨噬细胞控制物理现象CD4+T巨噬细胞的控制能力减低。SP四组用粉红色的中央线和左上角暗示，HD四组用灰色的中央线和左上角暗示，浅粉红色的中央线/左上角暗示遗传物质sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(应答者)被标示为CFSE, Treg按通过观察的数量校准。用抗CD3 /28微珠来时化巨噬细胞，养成3同一天进行时流式巨噬细胞练成扫描。(a-d)与CD4+应答者相比较应的treg养成(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者养成。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE可抑制总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制总和。运用于阴性对照(激来时的响应巨噬细胞不含treg)计算可抑制总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差该系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 物理现象CD4+T巨噬细胞对加速十分困难的T巨噬细胞来时化的可抑制更敏感。SP四组用粉红色的中央线和左上角暗示，HD四组用灰色的中央线和左上角暗示，浅粉红色的中央线/左上角暗示遗传物质sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞进行时分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标示，treg按通过观察的数量校准。用抗CD3 /28微珠来时化巨噬细胞，养成3同一天进行时流式巨噬细胞练成(CD25反染)和巨噬生长因子该系统性。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同养成。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE可抑制花红(b)。(c,d) CD25可抑制花红(c)和CD134可抑制花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在上海交通大学里面的突显。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差该系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们计算出来的结论是，来自加速十分困难子的来时化潜意识CD4+Treg在GITR突显里面受益了扩展和非常丰富，突显了进一步研究工作Treg在1HG哮喘风险个体里面的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28